当前位置: 首页 > 科学研究 > 学术论文 > 正文 >

玉米病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析

时间: 2012-03-21 点击次数:次 作者:


Journal: 浙江大学学报,2011,38

Author: 王静,刘丽,张志明,赵茂俊,潘光堂

Abstract:

采用逆转录聚合酶链式反应(RT‐PCR)方法从耐玉米穗粒腐病自交系R15 中分离得到病程相关蛋白1(pathogenesis‐related protein 1 , PR1)基因的开放阅读框,命名为ZmPR1 ,测序结果显示该序列长为528 bp ,编码175 个氨基酸,其蛋白质分子质量为18 .7 ku .利用NCBI/Blastp 和Genedoc 软件进行同源性比对显示,ZmPR1 基因编码蛋白与水稻、小麦、拟南芥等高等植物中的PR1 蛋白相似性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白(cysteine‐rich secretory protein , CAP) 的保守结构域.将构建的重组载体pET32a( + )‐ZmPR1 在宿主菌Escherichia coli BL21 中经异丙基硫代‐β‐D‐半乳糖苷( IPTG) 诱导表达融合蛋白,在不同的诱导时间、诱导温度和IPTG 诱导浓度下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS‐PAGE) 分析结果表明,ZmPR1 基因的最佳诱导条件为IPTG 终浓度0.6mmol.L -1 ,诱导温度28 ℃ ,且诱导时间对表达量影响不大.免疫印迹(Western blot)检测证实有39 ku的融合蛋白表达,表明ZmPR1 基因在大肠杆菌中已成功表达,这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备提供了一定的基础。

Link: http://www.journals.zju.edu.cn/agr/CN/abstract/abstract9950.shtml

 

上一篇:调控植物花发育的miRNAs的研究进展

下一篇:玉米及其近缘种大刍草的核型研究